1、范圍

 

    本文件規定了采用表面增強拉曼光譜法快速測定魚(yú)肉中孔雀石綠殘留量的方法。

 

    本文件適用于魚(yú)肉中孔雀石綠的表面增強拉曼光譜快速篩查檢測。

 

 

2、規范性引用文件

 

    下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和實(shí)驗方法

 

    GB/T20361-2006水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法

 

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

 

3.1  表面增強劑surfaceenhancer

 

    能夠顯著(zhù)增強吸附在其表面的分子的拉曼散射信號的納米結構材料。

 

3.2  空白樣品blanksamples

 

    不含目標分析物，且組成及物理化學(xué)性質(zhì)與檢測樣品相同或充分相似的樣品。[來(lái)源：GB/T32467-2015，有修改]

 

 

4、方法原理

 

    試樣中的孔雀石綠殘留用乙腈提取，經(jīng)中性氧化鋁柱凈化后，用表面增強拉曼檢測儀測定?？兹甘G分子與表面增強劑混合后，目標分子吸附在表面增強納米粒子上從而增強其拉曼散射信號。表面增強拉曼檢測儀可通過(guò)自動(dòng)識別特征峰對孔雀石綠進(jìn)行定性檢測。

 

 

5、試劑與材料

 

    本方法所用水為GB/T6682規定的三級水。

 

5.1  試劑

 

5.1.1  乙腈（CH3CN）：分析純。

 

5.1.2  醋酸銨（CH3COONH4）：分析純。

 

5.1.3  無(wú)機鹽混凝劑：1mol/L氯化鈉水溶液，或其他相當的無(wú)機鹽溶液。

 

5.1.4  醋酸銨溶液（5mmol/L）：稱(chēng)取0.385g醋酸銨，用水溶解，定容至1000mL，現用現配。

 

5.2  標準品

 

5.2.1  孔雀石綠標準品（CAS569-64-2）：純度≥99.0%。

 

 

5.3  標準溶液配制

 

5.3.1  孔雀石綠標準儲備溶液（50μg/mL）

 

    稱(chēng)取5.0mg（精確至0.01mg）孔雀石綠標準品于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，-18°C避光保存，有效期3個(gè)月。

 

5.3.2  孔雀石綠標準中間溶液（0.5μg/mL）

 

    吸取1.00mL孔雀石綠標準儲備溶液于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，-18°C避光保存，有效期1個(gè)月。

 

5.3.3  孔雀石綠標準工作溶液（5μg/L）

 

    吸取1.00mL孔雀石綠標準中間溶液于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，現用現配。

 

5.4  材料

 

5.4.1  表面增強劑：納米金-三聚氰胺海綿[1]，納米金，納米銀，或其他適用。

 

5.4.2  中性氧化鋁柱：80~120目，使用前用5mL乙腈活化。

 

5.4.3  有機0.2μm濾膜。

 

 

6、儀器和設備

 

6.1  表面增強拉曼光譜儀。

 

6.2  分析天平：感量0.01mg、0.01g。

 

6.3  離心機：轉速?4000r/min。

 

6.4  渦旋儀。

 

6.5  勻漿機。

 

6.6  超聲波清洗儀。

 

6.7  旋轉蒸發(fā)儀。

 

6.8  KD濃縮瓶：25mL。

 

 

7、試樣的制備與保存

 

7.1  試樣的制備取適量新鮮或解凍的空白或供試組織的可食部分，絞碎，并使均質(zhì)。

 

    a)取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試樣；

 

    b)取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試樣；

 

7.2  試樣的保存-18°C以下保存。

 

 

8、步驟

 

8.1  提取

 

    稱(chēng)取約5.0g(±0.01g)的試樣于50mL離心管中。加入11mL乙腈，超聲振蕩提取2min，渦旋30s，4000r/min離心5min，將上清液收集到25mL比色管中。殘渣再加乙腈11mL，重復提取一次，合并上清液。用乙腈定容至25mL，混勻備用。

 

8.2  凈化

 

    移取5.0mL上述提取液至活化的中性氧化鋁柱上，用KD濃縮瓶接收濾液。用4.0mL乙腈清洗中性氧化鋁柱并收集所有濾液。45°C旋轉蒸發(fā)至近干，用乙腈將殘液定容1mL，超聲震蕩5min。加入1.0mL5mmol/L醋酸銨，超聲震蕩1min，經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾。

 

8.3  測定

 

8.3.1  表面增強拉曼光譜儀參考條件

 

    激光能量≥100mW。

 

    數據采集時(shí)間≥2s。

 

    激光波長(cháng)785nm±1nm。

 

    響應范圍300cm-1~1800cm-1，或大于該響應范圍。

 

8.3.2  樣品的測定

 

    將待測溶液、表面增強劑和無(wú)機鹽混凝劑按5:1:1的比例加入樣品池中，混合后進(jìn)行拉曼檢測。曝光時(shí)間為30s。

 

8.3.3  空白試樣的測定

 

    稱(chēng)取5.0g空白試樣，按照8.1和8.2步驟與樣品同法操作，拉曼光譜儀檢測。

 

8.3.4  加標試樣的測定

 

    稱(chēng)取5.0g空白試樣于離心管中，加入5mL孔雀石綠標準工作溶液（5.3.3），按照8.1和8.2步驟與樣品同法操作，表面增強拉曼光譜儀檢測。

 

8.4  結果的判定

 

    檢測基于光譜435cm-1（±10cm-1）、1171cm-1（±10cm-1）、1615cm-1（±10cm-1）處的特征拉曼光譜，對樣品中孔雀石綠的含量進(jìn)行判定。若同時(shí)存在上述特征峰且信噪比大于3，則檢測結果判定為陽(yáng)性。陰性結果代表該樣品中不含有孔雀石綠或濃度低于5.0μg/kg。每批樣品應同時(shí)進(jìn)行空白實(shí)驗和加標樣品對照質(zhì)控實(shí)驗，且空白試樣測定結果應為陰性，加標試樣測定結果應為陽(yáng)性。

 

8.5  復檢和確證

 

    本方法為初篩方法，若初檢結果為陽(yáng)性，需要按照8.1和8.2步驟重新檢測；重復檢測結果仍為陽(yáng)性，需要采用參比方法確證。參比標準為GB/T20361-2006《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法》。當結果判定為陽(yáng)性時(shí)，以參比標準方法確證結果為最終報告值。

 

 

9、方法的靈敏度和準確性驗證

 

9.1  靈敏度該方法中孔雀石綠殘留物的檢出限為5.0μg/kg。

 

9.2  準確性驗證在相同條件下進(jìn)行至少三次連續的獨立測定，結果為一致。

 

 

10、檢測報告檢

 

    測報告應包含以下數據:

 

   ——鑒定樣品所需的所有信息；

 

    ——對本文件的引用；

 

    ——本文件中未指定或視為可選的任何操作細節，以及可能影響測試結果的任何事件的細節；

 

    ——測試日期；

 

    ——測試結果

 

附錄A（資料性）

孔雀石綠拉曼光譜示例

 

A.1孔雀石綠的拉曼光譜

 

圖A.1孔雀石綠（MG）和隱色孔雀石綠（LMG）的拉曼光譜

 

A.2含有不同濃度孔雀石綠的魚(yú)肉樣品的表面增強拉曼光譜

 

 

圖A.2含有不同濃度孔雀石綠的魚(yú)肉樣品的表面增強拉曼光譜圖（A：10μg/kg；B：5.0μg/kg；C：1.0μg/kg；D：空白）

 

素材來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，如有侵權請聯(lián)系刪除。