1、范圍

 

    本文件規定了食品中32種禁用水溶性合成色素（見(jiàn)附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

 

    本文件適用于飲料、葡萄酒、糖果、調味醬、豆制品、熟肉等食品中32種禁用水溶性合成色素的測定。

 

 

 

2、規范性引用文件

 

    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法

 

    GB/T33087儀器分析用高純水規格及試驗方法

 

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

 

    本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

 

4、原理

 

    試樣經(jīng)甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液經(jīng)氮吹置換溶劑后，經(jīng)C18萃取小管凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標法定量。

 

 

5、試劑和材料

 

    除另有說(shuō)明，本實(shí)驗使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規定的一級水或GB/T33087中規定的高純水。

 

5.1  試劑

 

5.1.1  甲醇（CH3OH）：色譜純。

 

5.1.2  乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

 

5.1.3  氨水（NH3·H2O）：含量20%～25%

 

5.1.4  5%氨水甲醇溶液：移取5mL氨水于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

 

5.1.5  10%甲醇水溶液：移取10mL甲醇于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.2  標準品

 

    32種禁用水溶性合成色素標準品：參見(jiàn)附錄B，純度≥95%。

 

5.3  標準溶液配制

 

5.3.1  標準儲備溶液（1000mg/L）：分別準確稱(chēng)取經(jīng)折算相當于50mg（精確到0.1mg）的色素標準品，置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.2  混合標準儲備液A組（10mg/L）：根據附錄A化合物的濃度分組，準確移取1mL的A組色素單標儲備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下保存，保存期3個(gè)月。

 

5.3.3  混合標準儲備液B組（100mg/L）：根據附錄A化合物的濃度分組，準確移取1mL的B組色素單標儲備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.4  混合標準中間液A組（1mg/L）：準確移取1mL混合標準儲備液A組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現配。

 

5.3.5  混合標準中間液B組（10mg/L）：準確移取1mL混合標準儲備液B組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現配。

 

5.3.6  混合標準工作溶液：根據需要，用10%甲醇水溶液將混合標準中間液稀釋成所需的標準工作溶液。

 

5.4  材料

 

5.4.1  十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。

 

5.4.2  親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。

 

6、儀器和設備

 

6.1  液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。

 

6.2  分析天平：感量為0.1mg、0.01g。

 

6.3  離心機：轉速不低于8000r/min。

 

6.4  超聲波清洗器。

 

6.5  氮吹儀。

 

7  分析步驟

 

7.1  試樣制備飲料、葡萄酒、調味醬試樣應混合均勻，含氣飲料及葡萄酒試樣應先加熱或超聲去除二氧化碳后混合均勻，糖果、豆制品、熟肉試樣經(jīng)食品粉碎機攪碎混勻，制備好的試樣密封冷藏避光保存，備用。

 

7.2  試樣提取

 

7.2.1  飲料、葡萄酒試樣

 

 

 

    稱(chēng)取試樣1g（準確至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。準確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。

 

7.2.2  糖果試樣

 

 

 

    糖果：稱(chēng)取試樣2g（準確至0.01g）于小燒杯中，加入5mL甲醇，微熱溶解后，溶液轉移至10mL比色管，用甲醇多次洗滌燒杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。準確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。

 

    其他：

 

7.2.3  調味醬、豆制品、熟肉試樣

 

    稱(chēng)取試樣2g（準確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入10mL5%氨水甲醇溶液，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復提取一遍，合并上清液。準確移取2mL上清液于氮吹儀上氮吹至干，用2mL甲醇復溶，轉移至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測試，同時(shí)做空白測試。

 

7.3  儀器參考條件

 

7.3.1  液相色譜參考條件

 

    a)  色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色譜柱；

 

    b)  流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇；梯度洗脫條件見(jiàn)表1；

 

    c)  柱溫：40°C；

 

    d)  進(jìn)樣量：2μL；

 

    e)  流速：0.4mL/min。

 

表1液相色譜梯度洗脫條件

 

時(shí)間，min	流動(dòng)相A，%	流動(dòng)相B，%
0.00	98	2
1.00	98	2
15.00	5	95
18.00	5	95
21.00	98	2

 

 

7.3.2  質(zhì)譜參考條件

 

    a)  離子源類(lèi)型：電噴霧電離源（ESI）；

 

    b)  掃描方式：負離子電離模式；

 

    c)  檢測方式：多反應監測MRM；

 

    d)  毛細管電壓：-2.5kV；

 

    e)  離子源溫度：150°C；

 

    f)  脫溶劑氣溫度：500°C；

 

    g)  脫溶劑氣流速：1000L/h；

 

    h)  錐孔氣流速：150L/h；

 

    i)  定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞電壓參見(jiàn)附錄A。

 

7.4  試樣溶液的測定

 

7.4.1  定性分析

 

    在同樣測試條件下，試樣溶液中禁用水溶性合成色素的保留時(shí)間與標準溶液相應峰的保留時(shí)間相對偏差在±25%以?xún)?，且檢測到的相對離子豐度，應當與濃度相當的標準溶液相對離子豐度一致。其允許偏差應符合表2的要求。

 

表2定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

單位為百分號

相對離子豐度	允許偏差
＞50	±20
20～50	±25
10～20	±30
≤10	±50

 

 

7.4.2  定量測定

 

    取試樣溶液和相應的標準溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準，以特征離子質(zhì)量色譜峰面積定量，按外標法計算。標準工作液及試樣溶液中的禁用水溶性合成色素響應值應在儀器檢測的線(xiàn)性范圍內。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標準溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)附錄B。

 

7.5  空白試驗

 

    除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行測定。

 

 

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