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葡萄酒中_番茄交鏈孢菌毒素_交鏈孢烯_交鏈孢毒素I_鏈格孢酚單甲醚_細交鏈孢菌酮酸_交鏈孢酚_騰毒素
1、范圍
本文件規(guī)定了葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素（番茄交鏈孢菌毒素、交鏈孢烯、交鏈孢毒素I、鏈格孢酚單甲醚、細交鏈孢菌酮酸、交鏈孢酚、騰毒素）的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。本文件適用葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素的測定和確證。
2、規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法
LS/T6133-2018糧油檢驗主要谷物中16種真菌毒素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
T/AFFI038-2023葡萄干中8種真菌毒素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
3、術語和定義
本文件沒有需要界定的術語和定義。
4、原理
試樣經(jīng)甲酸乙腈溶液超聲提取，QuEChERS法凈化后，經(jīng)反相色譜柱分離，以保留時間定性，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定和確證，外標法定量。
5、試劑和材料
本方法所用的試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。
5.1 試劑
5.1.1 乙腈：色譜純。
5.1.2 甲醇：色譜純。
5.1.3 甲酸：優(yōu)級純。
5.1.4 氯化鈉：優(yōu)級純。
5.1.5 無水硫酸鎂粉末。
5.1.6 十八烷基（C18）粉末。
5.1.7 N-丙基乙二胺（PSA）粉末。
5.1.8 1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸用乙腈定容到100mL。
5.1.9 50%乙腈溶液：取50mL乙腈和50mL水混合均勻。5.2標準品全國團體標準信息平臺
T/NAIA 0294—2024 2
5.2.1 標準品：番茄交鏈孢菌毒素（AAL，CAS號79367-52-5）、交鏈孢烯（ALT，CAS號29752-43-0）、交鏈孢毒素I（ATX-1，CAS號56258-32-3）、鏈格孢酚單甲醚（AME，CAS號26894-49-5）、細交鏈孢菌酮酸（TEA，CAS號610-88-8）、交鏈孢酚（AOH，CAS號641-38-3）、騰毒素（TEN，CAS號28540-82-1）。
5.2.2 標準儲備液（100.0μg/mL）：分別準確移取7種鏈格孢霉毒素標準物質(zhì)適量，分別用乙腈溶解并定容,配制成100.0μg/mL的標準儲備溶液，于-20°C避光貯存。
5.2.3 混合標準儲備溶液的配制：分別準確吸取7種鏈格孢霉毒素各1.0mL于10mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合標準儲備液于-20°C避光貯存。
CAS號：28540-82-1，商品編號：XB06354，品牌：XBRM，型號：100μg/mL，規(guī)格：1ml
5.2.4 7種真菌毒素標準工作溶液：分別準確吸取不同體積混合標準儲備液，用空白葡萄酒基質(zhì)定容至1.0mL，配制成7種鏈格孢霉毒素的濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的系列標準工作溶液，臨用現(xiàn)配。
6、儀器和設備
6.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源。
6.2 天平：感量0.1mg和0.01g。
6.3 渦旋混合器。
6.4 高速冷凍離心機：最大轉(zhuǎn)速10000r/min。
6.5 超聲波發(fā)生器。
6.6 氮吹儀。
7、分析步驟
7.1 試液的提取
稱取10g（精確至0.01mg）混勻的葡萄酒樣品于50mL具塞離心管中,準確加入10mL含1%甲酸的乙腈溶液和5g氯化鈉，渦旋混勻，超聲提取10min，8000r/min離心5min。吸取6mL上清液加入至盛有無水硫酸鎂150mg，C18粉末50mg和N-丙基乙二胺（PSA）50mg的凈化管中，經(jīng)渦旋離心，對提取物進行凈化處理。移取上清液2.0mL于45°C氮氣保護下吹干，用50%的乙腈溶液復溶至2.0mL，經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾后上機測定。
7.2 儀器參考條件
7.2.1 液相色譜參考條件7.2.1.1色譜柱：C18，2.1mm×100mm，粒徑1.7μm或性能相當。
7.2.1.2 柱溫：25°C。
7.2.1.3 流動相：A-水（含0.1%甲酸），B-甲醇；梯度洗脫見表1。
7.2.1.4 流速：0.25mL/min。
7.2.1.5 進樣量：5μL。
表1流動相及梯度洗脫條件
| 時間/min | 流速/（mL/min） | 流動相A/% | 流動相B/% |
| 0.00 | 0.25 | 90 | 10 |
| 1.00 | 0.25 | 85 | 15 |
| 2.00 | 0.25 | 80 | 20 |
| 8.00 | 0.25 | 40 | 60 |
| 13.00 | 0.25 | 17 | 83 |
| 15.00 | 0.25 | 5 | 95 |
| 15.10 | 0.25 | 90 | 10 |
| 18.00 | 0.25 | 90 | 10 |
7.2.2 質(zhì)譜參考條件
7.2.2.1 離子源：電噴霧離子源（ESI）。
7.2.2.2 掃描方式：正離子掃描和負離子掃描。
7.2.2.3 檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）。
7.2.2.4 脫溶劑氣溫度：325°C。
7.2.2.5 脫溶劑氣流速：800L/Hr。
7.2.2.6 錐孔流速：150L/Hr。
7.2.2.7 定性離子對、定量離子對、碰撞能量等參數(shù)參見附錄A。
7.3 定量測定
根據(jù)試液中被測物含量情況，選定濃度相近的基質(zhì)標準混合使用液，基質(zhì)標準混合使用液和待測試液中被測物的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內(nèi)?；|(zhì)標準混合使用液與試液等體積進樣測定。標準溶液及試液均按7.2.1和7.2.2規(guī)定的條件進行測定，如果試液中與標準溶液相同的保留時間有峰出現(xiàn)，則對其進行確證，7種鏈格孢霉毒素的參考保留時間見表2。7種鏈格孢霉毒素標準品的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄B，采用基質(zhì)溶液校準曲線外標法定量。
表2 參考保留時間
| 被測物名稱 | 保留時間/（min） |
| 番茄交鏈孢菌毒素（AAL） | 3.89 |
| 交鏈孢烯（ALT） | 4.17 |
| 交鏈孢毒素I（ATX-1） | 4.37 |
| 鏈格孢酚單甲醚（AME） | 5.87 |
| 細交鏈孢菌酮酸（TEA） | 8.13 |
| 交鏈孢酚（AOH） | 8.99 |
| 騰毒素（TEN） | 9.54 |
7.4定性測定
經(jīng)確證分析被測物質(zhì)色譜峰保留時間與標準物質(zhì)相一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)。同時所選擇離子的豐度比與標準溶液中相關離子的相對豐度一致，相似度在允許偏差之內(nèi)（見表3），則可判定樣品中存在對應的被測物。
表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差
| 相對離子豐度 | ＞50% | ＞20%至50% | ＞10%至20% | ≤10% |
| 允許的相對偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
7.5空白試驗
除不加試樣外，均按上述步驟進行。
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