1、范圍

 

    本文件規定了混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的高效液相色譜測定方法。

    本文件適用于混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷一氫查耳酮的測定。

 

    本方法糖精鈉檢出限為200 mgkg、紐甜檢出限為50 mgg、新甲基橙皮苷二氫查耳酮檢出限為20mg/kg,糖精鈉定量限為400 mgkg、紐甜定量限為100 mgkg、新甲基橙皮苷二氫查耳酮定量限為40 mg/kg

 

2 規范性引用文件

    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件該日期對應的版本適用于本文件:是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

    GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法

    GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

 

3術(shù)語(yǔ)和定義

    本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

4 原理

    混合型飼料添加劑甜味劑充分溶解在30%的乙腈水溶液后用配有紫外(UV)檢測器或二極管陣列(DAD)檢測器的高效液相色譜儀測定，外標法定量計算出糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。

 

 

5 試劑與材料

    除非有特殊說(shuō)明，本測定方法中所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的1·級水。

 

5.1 乙腈(色譜級)

5.2 磷酸氫二銨。

5.3 磷酸。

5.4 糖精鈉標準品(CAS:6155-57-3):純度>99%

5.5 紐甜標準品(CAS:165450-17-9):純度>98%。

5.6 新甲基橙皮苷氫查耳酮標準品(CAS:20702-77-6):純度>99.5%。5.7 0.02 mol 磷酸氫二銨緩沖溶液:稱(chēng)取 2.64g磷酸氫二銨，加入 700mL, 水，用磷酸調 pH 至 2.5,定容到1000mL容量瓶中，用0.45um 濾膜抽濾。

 

5.8 糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮昔二氫查耳酮標準溶液:稱(chēng)取0.1g(精確至0.00001g)預先在 120℃烘箱烘干 4h 的糖精鈉標準品(5.4)、0.1g(精確至 0.00001g)紐甜標準品(5.5)、0.1g(精確至 0.00001g)新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準品(5.6)于100mL,容量瓶中，加入 30%乙腈水溶液定容，搖勻靜置。此溶液糖精鈉濃度為1mg/m，組甜濃度約為1mg/m、新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度為1mg/mL。

 

5.9 糖精鈉、組甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準工作溶液:分別吸取 0.1mL，0.5mL,1mL，5mL,10mL糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷一氫査耳酮標準溶液至10 mL,容量瓶中，用 30%乙腈水溶液定容,臨用現配。

5.10 水性微孔濾膜:孔徑0.45 m。

 

6 儀器與設備

6.1  分析天平:感量 0.00001g，感量0.0001g.

6.2 超聲波震蕩器。

6.3 高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測器或二極管陣列(DAD)測器。

 

7 試樣制備與保存

    按GB/T20195制備樣品，至少200g;粉碎使其全部通過(guò)0.42mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入口瓶中，避光保存，備用。

 

8 測定步驟

8.1 樣品溶液制備

    稱(chēng)取試樣 0.5g(精確至 0.0001g)于50m,燒杯中,加入適量30%乙腈水溶液超聲波震蕩提取10min;將提取液移入 100m 容量瓶中使用 30%乙腈水溶液定容，搖勻靜置。提取液經(jīng) 0.45um 濾膜過(guò)濾后用于色譜分析。

8.2 高效液相色譜參考條件

a) 色譜柱:Cs柱，柱長(cháng)250mm，內徑4.6mm，粒度5pm:

b) 流動(dòng)相:乙腈+0.02moL磷酸氫二銨緩沖溶液-35+65;

c) 流速:1mL/min;d)檢測波長(cháng):糖精鈉、新甲基橙皮苷二氫査耳酮檢測波長(cháng)283nm;紐甜檢測波長(cháng)210nm。e)杜溫:30℃℃:

f) 進(jìn)樣體積:10L。

8.3 標準系列工作溶液和試樣溶液測定

    分別吸取糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標準工作溶液和試樣溶液，按8.2的色譜條件進(jìn)行色譜分析測定。測定時(shí)，樣品溶液與標準工作溶液等體積進(jìn)樣測定，并保證樣品溶液中的響應值均應在標準工作曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍內,試樣溶液中待測物超出線(xiàn)性范圍時(shí)適當稀釋后再用于色譜分析。糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷一氫查耳酮標準溶液的高效液相色譜圖參見(jiàn)附錄A。

 

9 結果計算與表述

    試樣中糖精鈉、紐甜和新甲基橙皮苷二氫査耳酮的含量w，以質(zhì)量分數“%”表示，按下式計算:

 

    式中:

    c-由標準曲線(xiàn)得出的試樣中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮首二氫査耳酮的濃度，單位為毫克每毫升(mg/mmL):

    V一試樣溶液總體積，單位為毫升(mL);

    n-稀釋倍數;

    m-試樣的質(zhì)量，單位為克(g);

    測定結果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結果保留至小數點(diǎn)后2位。

 

10 精密度

    在重復性條件下，兩次獨測定結果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的5%。

 

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