1、范圍

    本文件規定了混合型飼料添加劑酸度調節劑中甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富酸、丙酸鈣的高效液相色譜測定方法。

 

    本文件適用于混合型飼料添加劑酸度調節劑中甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富馬酸、丙酸鈣的測定。

 

    本方法檢出限甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、丙酸鈣為250 mgkg，富馬酸為2.5 mgg，定量限甲酸鈣乳酸、檸檬酸、丙酸鈣為1000 mg/kg，富馬酸為10 mgkg.

 

2、規范性引用文件

 
    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件該日期對應的版本適用于本文件;是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

 

    GB/T6682 分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法

 

    GB/T 201955 動(dòng)物飼料試樣的制備

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

    本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

4、原理

    混合型飼料添加劑酸度調節劑經(jīng)堿化、加熱分溶解和調整pH后用配有紫外(UV)測器或二極管陣列(DAD)檢測器的高效液相色譜儀測定，外標法定量計算出甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富馬酸、丙酸鈣的含量。

 

 

 

5、試劑與材料

 

    除非有特殊說(shuō)明，本測定方法中所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682規定的一級水。

 

5.1  乙晴(色譜純)

5.2  磷酸。

5.3  氫氧化鈉。

 

5.4  硫酸。

5.5  0.05%磷酸溶液:移取磷酸0.50m至1000m 容量瓶中，加水定容。

5.6  10molNaOH 溶液:移取28.00mL,飽和 NaOH 溶液于 50.00mL,容量瓶中，定容至刻度，搖勻。

 

5.7  20%硫酸溶液(V/V):量取硫酸20m，使用玻璃棒引流緩緩加入裝有80ml水的燒杯中，邊倒邊攪拌，冷卻至室溫。

5.8  甲酸鈣標準品(CAS:544-17-2):純度>99%。

5.9  乳酸鈣標準品(CAS:814-80-2):純度>61.18%(折算成乳酸含量)。

5.10  檸檬酸標準品(CAS:77-92-9):純度>99.5%。

5.11  富馬酸標準品(CAS:110-17-8):純度>99%。

5.12  丙酸鈣標準品(CAS:4075-81-4):純度>99%。

 

5.13  甲酸鈣標準儲備液:稱(chēng)取甲酸鈣標準品(5.8)0.1g(精確至0.00001g)于10m 容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液濃度為10mg/mL，2℃~8 ℃條件下儲藏，保存期3個(gè)月。

 

5.14  乳酸鈣標準儲備液:準確稱(chēng)取 0.1g(精確至 0.00001g)乳酸鈣標品(5.9)于10mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度。此溶液此溶液濃度為10mgmL，2℃~8 ℃條件下儲藏，保存期3個(gè)月。

 

5.15  檸檬酸標準儲備液:稱(chēng)取檸檬酸標準品(5.10)0.1g(精確至0.00001g)于10mL 容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液濃度為10mg/mL，2℃~8 ℃條件下儲藏，保存期3個(gè)月。

 

5.16  富馬酸標準儲備液:稱(chēng)取富馬酸標準品(5.11)0.1g(精確至0.00001g)于100mL容量瓶中，加入 30mL~40mL 水,超聲 30min 進(jìn)行溶解,取出冷卻后,用水定容至刻度。此溶液濃度為 1mg/mL,2 ℃~8 ℃條件下儲藏，保存期3個(gè)月。

 

5.17  丙酸鈣標準儲備液:稱(chēng)取丙酸鈣標準品(5.12)01g(精確至0.00001g)于10mL容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液濃度為10mg/mL，2℃~8℃條件下儲藏，保存期3個(gè)月。

 

5.18  混合酸標準中間溶液:分別準確吸取5.00nL甲酸鈣標準儲備液(5.13)、5.00mL,乳酸鈣標準儲備液(5.14)、5.00mL檸檬酸標準儲備液(5.15)、0.50m富馬酸標準儲備液(5.16)、5.00mL 丙酸鈣標準儲備液(5.17)于50mL容量瓶中，用水定容到刻度，搖與靜置。此為混合酸中間溶液，臨用現
配。

 

5.19  混合酸標準工作溶液:分別準確吸取0.10m、0,50mL、1.00mL、5.00m工、和 10.00mL 混合酸中間溶液(5.18)于 10m,容量瓶中，用水定容到刻度，搖勻靜置。此為混合酸標準工作溶液，臨用現配。

 

5.20  水性微孔濾膜:孔徑0.45pm。

 

6  儀器與設備

6.1  分析天平:感量0.00001g，感量0.0001g。

6.2  高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測器或一極管陣列(DAD)檢測器。

6.3  pH計。

6.4  恒溫水浴鍋。

 

7、試樣制備與保存

   至少200 g，粉碎使其全部通過(guò)0.42mm孔徑的分析篩，充分混與，裝入按GB/T20195制備樣品，:口瓶中，避光保存，備用。

 

8、測定步驟

 

8.1 樣品溶液制備

8.1.1 甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、丙酸鈣

    稱(chēng)取樣品 1.0 g(精確到 0.0001g)于250m,的錐形瓶中,加入30~40mL的水,再加入2.00mL 10molNaOH 溶液(5.6)，在 95℃的恒溫水浴鍋中加熱 30min。取出趁熱滴入 10 滴 20%硫酸溶液(5.7)，搖勻。放置冷卻劍常溫后,用 20%硫酸溶液(5.7)及 10molL, NaOH 溶液(5.6)溶液調節 pH 至 2.10-2.40。將溶液轉移至 100mL,容量瓶中，用水定容，搖勻靜置。取部分溶液過(guò) 0.45um 濾膜，用于色譜分析。

 

8.1.2 富馬酸

    取8.1.1中溶液的上層清液1.00ml F100mL 容量瓶中，用水定容，搖勻靜置。溶液過(guò)0.45um濾膜后作為樣液，用于色譜分析。

8.2 高效液相色譜參考條件

    a)色譜柱:C18柱，柱長(cháng)250mm，內徑4.6mm，粒度5um;

    b)流動(dòng)相:V(乙腈)+V(0.05%酸溶液)=1+99;

    c)流速:1mLmin:

 

    d)檢測波長(cháng):210nm;

    e)柱溫:25℃℃;

    f)進(jìn)樣體積:10uL。

8.3 標準系列溶液和試樣溶液測定

分別吸取混合酸標準工作溶液和試樣溶液，按8.2的色譜條件進(jìn)行色譜分析測定。測定時(shí)，樣品溶液與標準工作溶液等體積進(jìn)樣進(jìn)行測定,并保證樣品溶液中的響應值均應在標準工作曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍內試樣溶液中待測物超出線(xiàn)性范圍時(shí)適當稀釋后用于色譜分析。甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富馬酸、丙酸鈣標準溶液的高效液相色譜圖參見(jiàn)附錄A。

 

 

 

9、結果計算與表述

試樣中甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富馬酸和丙酸鈣的含量 w，以質(zhì)量分數“%”表示，按下式計算:

 

式中:

 

    c-由標準曲線(xiàn)得出的試樣中甲酸鈣、乳酸、檸檬酸、富馬酸、丙酸鈣的濃度，單位為毫克每毫升(mg/L):

    V-試樣溶液總體積，單位為毫升(mL):

    n-稀釋倍數;

    m-試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

    測定結果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結果保留至小數點(diǎn)后2位。

 

10、精密度

    在重復性條件下，兩次獨立測定結果與其算術(shù)平均值的絕對值不大該算術(shù)平均值的5%。

 

 

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