1、范圍

 

    本文件規定了食品中氨基比林的拉曼光譜快速檢測方法。

 

    本文件適用于聲稱(chēng)具有解熱鎮痛、治療風(fēng)濕等功能的食品中氨基比林成分的快速檢測。

 

 

2、規范性引用文件

 

    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T 6682分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法。

 

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

 

    本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

 

 

4、原理

 

    不同物質(zhì)具有與其分子結構相對應的特征拉曼光譜。一般樣品經(jīng)稀釋?zhuān)瑥碗s樣品經(jīng)液液萃取，加表面增強試劑對信號增強，進(jìn)行拉曼光譜掃描。與標準譜圖庫中的氨基比林特征拉曼位移（570 cm-1±3cm-1,637 cm-1±3cm-1,1591cm-1±3cm-1）進(jìn)行匹配識別，對樣品中的氨基比林進(jìn)行定性判定。

 

 

5、試劑和材料

 

5.1  試劑除另有規定外，試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。

 

5.1.1  乙酸乙酯，色譜純。

 

5.1.2  甲醇，色譜純。

 

5.1.3  色素凈化管：2mL離心管配比：0.12g無(wú)水硫酸鎂+0.04g活性炭。

 

5.1.4  堿化試劑：準確稱(chēng)取8 g氫氧化鈉，用水定容至100 mL。

 

5.1.5  促凝劑：1 mol/L的硝酸。

 

5.1.6  表面增強試劑：納米金溶膠或相當者。避光，4 °C~20 °C保存，有效期6個(gè)月。

 

    注：表面增強試劑的參考配制方法：納米金溶膠：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加熱至沸，劇烈攪拌下準確加入1.0mL 1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，金黃色的氯金酸水溶液在2min內變?yōu)榧t色，繼續煮沸15min，冷卻后用蒸餾水補加到100mL。

 

5.1.7  氨基比林標準品：C13H17N3O，CAS號：58-15-1，純度≥98%。

 

5.1.8  氨基比林標準溶液：準確稱(chēng)取標準物質(zhì)0.1000 g，甲醇（HPLC）準確定容至100 mL。保證配制樣本濃度為1 mg/mL，于4 °C避光保存，有效期1個(gè)月。

 

5.2  材料

 

5.2.1  塑料具塞離心管：2 mL和10 mL。

 

5.2.2  移液吸頭：200μL，1000 μL和5000 μL。

 

 

6、儀器設備

 

6.1  便攜式拉曼光譜儀穩頻激光光源：發(fā)射波長(cháng)為785±1 nm，線(xiàn)寬<0.1 nm，能量≥250 mW；光譜分辨率≤10 cm-1；光譜響應范圍300cm-1~2700 cm-1，或大于該響應范圍。

 

6.2  移液器：100 μL、1000 μL和5000 μL。

 

6.3  渦旋振蕩器。

 

6.4  離心機：轉速≥10000r/min。

 

6.5  電子天平：感量為0.01 g和感量為0.0001 g。

 

 

7、測定步驟

 

7.1提取

 

7.1.1  膠囊類(lèi)樣品

 

    取待測樣品內部粉末0.5 g，倒入10 mL離心管中，從步驟2開(kāi)始進(jìn)行處理；向離心管中加入3000 μL乙酸乙酯，渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉/分鐘離心30秒；取1000 μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉/分鐘離心10秒，取上層清液待測；

 

7.1.2  藥丸類(lèi)樣品

 

    將待測樣品用潔凈容器破碎后取0.5 g，用潔凈容器破碎后，倒入10 mL離心管中，從步驟2開(kāi)始進(jìn)行處理；向離心管中加入3000 μL乙酸乙酯（渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉/分鐘離心30秒；取1000 μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉全國團體標準信息平臺
T/HBIQA 0002.4—20243/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉/分鐘離心10秒，取上層清液待測；

 

7.1.3  液體類(lèi)樣品

 

    用移液器（或潔凈滴管）吸取1000μL待測樣品，加入到10 mL離心管中，從步驟2開(kāi)始進(jìn)行處理；向離心管中加入2000 μL乙酸乙酯，渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉/分鐘離心30秒；取1000 μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉/分鐘離心10秒，取上層清液待測。

 

7.2  測定

 

7.2.1  拉曼光譜儀器分析參考條

 

    激光能量≥250 mW，數據采集時(shí)間≥4 s。

 

7.2.2  表面增強和測定

 

    向檢測瓶中依次加入300 μL表面增強試劑（5.1.6），50 μL待測液，100 μL促凝劑（5.1.5），混勻后立即置于檢測池中檢測。

 

7.3  質(zhì)控試驗

 

    每批樣品應同時(shí)進(jìn)行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。

 

7.3.1  陰性對照

 

    稱(chēng)取空白試樣，按照7.1和7.2步驟與樣品同法操作。

 

7.3.2  陽(yáng)性對照

 

    準確稱(chēng)取空白試樣20 g置于15 mL具塞離心管中，加入100 μL氨基比林標準溶作液（5.1.8），使待測樣本濃度為20 mg/kg，按照7.1和7.2步驟與樣品同法操作。

 

 

8、結果計算和表述

 

8.1  定性

 

    儀器軟件將測試結果與標準譜圖庫中的氨基比林進(jìn)行匹配識別，根據譜圖570 cm-1±3 cm-1,637 cm-1±3 cm-1,1591 cm-1±3 cm-1處特征拉曼光譜，對樣品中的氨基比林進(jìn)行結果判定，當樣品的拉曼峰包含該目標物的2個(gè)以上特征峰判定為陽(yáng)性。陰性代表該樣品不含有氨基比林或者低于檢出限，陽(yáng)性則代表該樣品含有氨基比林且大于等于檢出限。氨基比林表面增強拉曼光譜圖見(jiàn)附錄A.1。

 

 

8.2 確證

 

    本方法為初篩方法，當檢測結果為陽(yáng)性時(shí)，應用其他技術(shù)手段進(jìn)行確證。

 

 

9、方法性能指標

 

9.1  檢出限

 

    本方法檢出限為20mg/kg。

 

9.2  靈敏度

 

    靈敏度應≥95%。

 

9.3  特異性

 

    特異性應≥95%。

 

9.4  假陰性率

 

    假陰性率應≤5%。

 

9.5  假陽(yáng)性率

 

    假陽(yáng)性率應≤5%。性能指標計算方法見(jiàn)附錄B中表B.1。

 

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