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食品添加劑茶黃素的檢測-國家食品標準
檢驗方法
A.1 安全提示
本標準的檢驗方法中使用的部分試劑具有毒性或腐蝕性,操作時(shí)應采取適當的安全和防護措施。使用易燃品時(shí),嚴禁使用明火加熱。
A.2 一般規定
本標準除另有規定外,所用試劑均為分析純,所用標準滴定溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑及制品應按GB/T601、GB/T602、GB/T603的規定制備,試驗用水應符合GB/T6682的規定。試驗中所用溶液在未注明用何種溶液配制時(shí),均指水溶液。
A.3 鑒別試驗
鑒別試驗可與茶黃素含量測定同時(shí)進(jìn)行,試樣溶液色譜圖中的主峰保留時(shí)間應與標準溶液色譜圖中的主峰保留時(shí)間基本一致。
A.4 茶黃素含量的測定
A.4.1 方法提要
試樣中的茶黃素經(jīng)含乙腈的穩定溶液提取后,經(jīng)液相色譜C18柱分離,紫外或二極管陣列檢測器檢測,外標法定量。
A.4.2 試劑與材料
A.4.2.1 乙腈:色譜純。
A.4.2.2 磷酸。
A.4.2.3 乙二胺四乙酸二鈉。
A.4.2.4 L-抗壞血酸。
A.4.2.5 磷酸溶液(0.1%):移取1mL磷酸至燒杯中,用適量水溶解后轉移至1000mL容量瓶并定容至刻度。
A.4.2.6 乙二胺四乙酸二鈉溶液(10mg/mL):稱(chēng)取1.00g(精確至0.01g)乙二胺四乙酸二鈉,用適量水溶解后轉移至100mL容量瓶并定容至刻度,臨用現配。
A.4.2.7 L-抗壞血酸溶液(10mg/mL):避光條件下稱(chēng)取1.00g(精確至0.01g)L-抗壞血酸,用適量水溶解后轉移至100mL棕色容量瓶并定容至刻度,臨用現配。
A.4.2.8 穩定溶液:分別移取50mL乙二胺四乙酸二鈉溶液(A.4.2.6)、50mLL-抗壞血酸溶液(A.4.2.7)和175mL乙腈(A.4.2.1)至1000mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,臨用現配。
A.4.3 標準品
A.4.3.1 茶黃素(TF)標準品(CAS號:4670-05-7):純度≥98%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì)。
A.4.3.2 茶黃素-3-沒(méi)食子酸酯(TF-3-G)標準品(CAS號:30462-34-1):純度≥98%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì)。
A.4.3.3 茶黃素-3’-沒(méi)食子酸酯(TF-3’-G)標準品(CAS號:28543-07-9):純度≥98%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì)。
A.4.3.4 茶黃素-3,3’-雙沒(méi)食子酸酯(TFDG)標準品(CAS號:30462-35-2):純度≥98%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì)。
A.4.4 準溶液配制
A.4.4.1 茶黃素標準儲備溶液(2.00mg/mL):分別準確稱(chēng)取茶黃素(TF)、茶黃素-3-沒(méi)食子酸酯(TF-3-G)、茶黃素-3’-沒(méi)食子酸酯(TF-3’-G)、茶黃素-3,3’-雙沒(méi)食子酸酯(TFDG)各20mg(精確至0.0001g),分別置于10mL棕色容量瓶中,各加入適量穩定溶液(A.4.2.8)溶解并定容至刻度,混勻。于4°C冰箱中保存,保存期6個(gè)月。
A.4.4.2 茶黃素混合標準系列工作溶液:分別準確移取適量TF、TF-3-G、TF-3’-G、TFDG標準系列儲備溶液于10mL容量瓶中,用穩定溶液(A.4.2.8)定容至刻度,配成20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL的混合標準工作溶液,臨用現配。
A.4.5 儀器和設備
A.4.5.1 高效液相色譜儀:帶有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
A.4.5.2 分析天平:感量為0.01g、0.0001g。
A.4.5.3 0.45μm聚四氟乙烯濾膜。
A.4.6 分析步驟
A.4.6.1 試樣溶液的制備準確稱(chēng)取試樣0.1g(精確至0.0001g),置于100mL棕色容量瓶中,用適量穩定溶液(A.4.2.8)溶解并定容至刻度?；靹蚝?經(jīng)0.45μm聚四氟乙烯濾膜過(guò)濾至棕色進(jìn)樣瓶中備用。
A.4.6.2 液相色譜參考條件參考條件如下:
a)色譜柱:C18反相色譜柱(150mm×4.6mm,3.5μm)或性能相當者。
b)流動(dòng)相:A相為乙腈(A.4.2.1),B相為磷酸溶液(A.4.2.5),梯度洗脫程序見(jiàn)表A.1。
c)流速:1mL/min;
d)柱溫:35°C;
e)進(jìn)樣量:10μL;
f)波長(cháng):278nm。
表A.1流動(dòng)相梯度洗脫程序
| 時(shí)間/min | A/% | B/% |
| 0.0 | 17.5 | 82.5 |
| 0.5 | 17.5 | 82.5 |
| 15.0 | 25 | 75 |
| 24.0 | 25 | 75 |
| 24.5 | 50 | 50 |
| 29.5 | 50 | 50 |
| 30.0 | 17.5 | 82.5 |
| 35.0 | 17.5 | 82.5 |
A.4.6.3 測定
在參考色譜條件下,分別將系列標準溶液、試樣溶液注入液相色譜儀中進(jìn)行測定。以混合標準系列溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,由色譜軟件工作站擬合標準曲線(xiàn)。試樣溶液測得峰面積,根據標準曲線(xiàn)得到待測液中各種茶黃素的質(zhì)量濃度。
各組分的參考保留時(shí)間和色譜圖見(jiàn)圖B.1。
A.4.7 結果計算
試樣中茶黃素各組分的質(zhì)量分數(wi)按式(A.1)計算:
式中:
ci———待測液中茶黃素各組分的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V———試樣溶液的體積,單位為毫升(mL);
m———試樣的質(zhì)量,單位為克(g);
1000———換算系數。
試驗結果以平行測定結果的算術(shù)平均值為準,保留3位有效數字。在重復性條件下獲得茶黃素的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于算術(shù)平均值的5%。
試樣中茶黃素的質(zhì)量分數(w)按式(A.2)計算:
ω=ωTF+ωTF-3-G+ωTF-3’-G+ωTFDG..............................(A.2)
式中:
ωTF———試樣中TF的質(zhì)量分數;
ωTF-3-G的質(zhì)量分數;
ωTF-3’-G———試樣中TF-3’-G的質(zhì)量分數;
ωTFDG———試樣中TFDG的質(zhì)量分數。
A.5 咖啡堿含量的測定
A.5.1 方法提要試樣中的咖啡堿經(jīng)甲醇-水溶液提取后,經(jīng)液相色譜儀C18柱分離,紫外或二極管陣列檢測器檢測,外標法定量。
A.5.2 試劑與材料
A.5.2.1 甲醇:色譜純。
A.5.2.2 乙腈:色譜純。
A.5.2.3 磷酸。
A.5.2.4 甲醇-水溶液(6+4):量取600mL甲醇加入400mL水,混勻。
A.5.3 標準品咖啡堿標準品(C8H10N4O2,CAS號:58-08-2):純度≥99%,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì)。
A.5.4 標準溶液配制
A.5.4.1 咖啡堿標準儲備溶液(1.00mg/mL):準確稱(chēng)取咖啡堿標準品10mg(精確至0.0001g),置于10mL棕色容量瓶中,加入適量甲醇-水溶液溶解并定容至刻度,混勻后作為標準儲備液備用。該溶液于4°C冰箱中保存,保存期6個(gè)月。
A.5.4.2 咖啡堿標準系列工作溶液:分別準確移取咖啡堿標準儲備液50.0μL、100μL、250μL、1.00mL、2.50mL、12.50mL于50mL容量瓶中,用甲醇-水溶液定容至刻度,配成1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、250μg/mL的標準系列工作溶液,臨用現配。
A.5.5 儀器和設備
A.5.5.1 高效液相色譜儀:帶有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
A.5.5.2 分析天平:感量為0.0001g。
A.5.6 分析步驟
A.5.6.1 試樣溶液的制備準確稱(chēng)取試樣0.05g(精確至0.0001g),置于100mL容量瓶中,用適量甲醇-水溶液溶解并定容,混勻,經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后備用。
A.5.6.2 液相色譜參考條件參考條件如下:a)色譜柱:C18反相色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)或性能相當者;b)流動(dòng)相:A相為甲醇,B相為水,梯度洗脫程序見(jiàn)表A.2;c)流速:1mL/min;d)柱溫:35°C;e)進(jìn)樣量:5μL;f)波長(cháng):273nm。
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