T/SATA 068-2024 動(dòng)物源性食品中氯霉素和甲硝唑殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
1、范圍
本方法適用于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對氯霉素和甲硝唑抗生素殘留量的同時(shí)測定。
本標準適用于豬、牛、雞、鴨、魚(yú)、蝦、貝類(lèi)中氯霉素和甲硝唑抗生素殘留量的測定。
2、規范性引用文件
下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB/T5009.1食品衛生檢驗方法理化部分總則
GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法GB/T8170數值修約規則與極限數值的表示和判定
GB/T22338-2008動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
GB/T27404實(shí)驗室質(zhì)量控制規范食品理化檢測
3、術(shù)語(yǔ)和定義
本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。
4、原理
采用乙酸乙酯提取試樣中氯霉素和甲硝唑藥物殘留,經(jīng)低溫離心,正己烷除油,氮吹、定容后,用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定目標物,內標法定量。
5、試劑
除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的一級水。
5.1 乙酸乙酯(C4H8O2):色譜純。
5.2 正己烷(C6H14):色譜純。
5.3 乙腈(C2H3N):色譜純。
5.4 乙酸銨(C2H7NO2):色譜純。
5.5 氫氧化銨(NH3OH,濃度為25%~28%)。
5.6 無(wú)水硫酸鈉(Na2SO4):使用前經(jīng)馬弗爐550°C灼燒2h,冷卻后密封保存。
5.7 5mmol/L乙酸銨溶液:稱(chēng)取0.39g乙酸銨,用水稀釋至1000mL,混勻。
5.8 氯霉素(C11H12Cl2N2O5,CAS:56-75-7)、D5-氯霉素(C11H7Cl2D5N2O5,CAS:202480-68-0)、甲硝唑(C6H9N3O3,CAS:443-48-1)、D4-甲硝唑(C6H5D4N4O3,CAS:1261392-47-5)標準物質(zhì):純度≥98%
5.9 標準儲備液:1000mg/mL。分別準確稱(chēng)取氯霉素、甲硝唑、D5-氯霉素、D4-甲硝唑標準品10.0mg(按照純度示值折算),用甲醇溶解并定容至10mL,配成1000mg/mL的標準儲備液,-20°C以下避光保存,保存期為12個(gè)月。
5.10 混合標準儲備液:分別準確吸取100μL氯霉素、甲硝唑標準儲備液,用甲醇定容至10mL,配成濃度為10mg/L的混合標準儲備液,-20°C以下避光保存,保存期為6個(gè)月。
5.11 混合內標儲備液:分別準確量取100μLD5-氯霉素、D4-甲硝唑標準儲備液,用甲醇定容至10mL,配成10mg/L的混合內標儲備液,-20°C以下避光保存,保存期為6個(gè)月。
5.12 標準使用液:準確吸取混合標準儲備液50μL,用10%乙腈-水溶液定容至10mL,標準使用液質(zhì)量濃度為0.05mg/L,4°C保存,保存期為7天。
5.13 內標使用液:準確吸取混合內標儲備液50μL,用10%乙腈-水溶液定容至10mL,內標使用液質(zhì)量濃度為0.05mg/L,4°C保存,保存期為7天。
1.14 混合標準工作液:分別準確吸取標準使用液5μL、10μL、20μL、50μL、100μL,內標使用液各40μL,用10%乙腈-水溶液定容至1.0mL,配制成氯霉素、甲硝唑含量為0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL標準系列,其中內標濃度為2ng/mL。臨用現配。
6 儀器
6.1 天平:感量為0.01g,0.1mg
6.2 組織搗碎機
6.3 渦旋混勻器
6.4 超聲波清洗器
6.5 離心機:≥14000r/min
6.6 氮吹儀
6.7氮氣發(fā)生器
6.8 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源
7 試樣制備與保存
7.1 試樣的的制備
取樣品約500g用肉類(lèi)組織搗碎機絞碎,裝入潔凈容器作為試樣,密封并標明標記。
7.2 試樣的的保存
將試樣于-18°C冰箱中保存。
8 測定步驟
8.1 提取稱(chēng)取5g(精確到0.01g)已經(jīng)均質(zhì)好的樣品于50mL離心管中,加入80μL內標標準使用液、15mL乙酸乙酯、0.5mL氫氧化銨、足量的無(wú)水硫酸鈉,渦旋混勻,超聲提取30min。在14000r/min,5°C下離心15min,將上清液轉移至另一干凈的離心管中,再在樣品管中加入上述試劑,重復提取一次。合并兩次提取的上清液,于50°C氮氣吹干。
8.2 凈化將離心管中的殘渣用2mL5%乙腈-水溶液溶解,渦旋30s,超聲1min,加入5mL正己烷,渦旋30s,在14000r/min,5°C離心15min,棄去正己烷,重復操作3次。取水層過(guò)0.22μm的尼龍濾膜,收集濾液待上機。
8.3 測定條件
8.3.1 液相色譜條件
a)色譜柱:C18(十八烷基硅烷,5μm,2.1×150mm),或相當者;
b)流動(dòng)相:A相5mmol/L的乙酸銨溶液,B相為乙腈。流速為0.3mL/min,梯度洗脫見(jiàn)表1;表1梯度洗脫程序
c)柱溫:40°C;
d)進(jìn)樣量:5μL。
圖A.1氯霉素(CAP)、D5-氯霉素(D5-CAP)、甲硝唑(MDZ)和D4-甲硝唑(D4-MDZ)多反應監測(MRM)色譜圖
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