以正式出版文本為準以正式出版文本為準

 

 

1、范圍

 

    本文件規定了冰葡萄酒中(E)-2己烯醛、(E)-2-庚烯醛、(E)-2-辛烯醛、(E,E)-2,4-庚二烯醛、2-甲基丙醛、3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基丙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、辛醛、癸醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、2,3-丁二酮、1-辛烯-3-酮、2-壬酮的氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。

 

    本文件適用于冰葡萄酒中(E)-2己烯醛、(E)-2-庚烯醛、(E)-2-辛烯醛、(E,E)-2,4-庚二烯醛、2-甲基丙醛、3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基丙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、辛醛、癸醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、2,3-丁二酮、1-辛烯-3-酮、2-壬酮的測定。

 

 

2、規范性引用文件

 

    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

 

    GB/T33087 儀器分析用高純水規格及試驗方法

 

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

 

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

 

3.1冰葡萄酒icewines

 

 

    將葡萄推遲采收,當氣溫低于-7°C使葡萄在樹(shù)枝上保持一定時(shí)間,結冰,在結冰狀態(tài)下壓榨,發(fā)酵,釀制而成的葡萄酒(在生產(chǎn)過(guò)程中不允許外加糖源)。

 

 

4、方法提要

 

    試樣中的待測物與鄰五氟苯甲基羥胺發(fā)生衍生反應后,經(jīng)固相萃取凈化后用氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜分析檢測,內標法定量。

 

 

5、試劑和材料

 

    除另有說(shuō)明外,所用試劑均為色譜純,水為符合GB/T33087規定的儀器分析用高純水。

 

5.1  試劑

 

5.1.1  甲醇(CH3OH,CAS號67-56-1)。

 

5.1.2  乙醇(C2H5OH,CAS號64-17-5)。

 

5.1.3  二氯甲烷(CH2Cl2,CAS號75-09-2)。

 

5.1.4  對氟苯甲醛(C7H5FO,CAS號459-57-4):純度≥98%。

 

5.1.5  硫酸(H2SO4,CAS號7664-93-9):分析純。

 

5.1.6  酒石酸氫鉀(KHC4H4O6,CAS號868-14-1):分析純。

 

5.1.7  酒石酸(C4H6O6,CAS號133-37-9):分析純。

 

5.1.8  硫酸銨[(NH4)2SO4,CAS號7783-20-2]:分析純。

 

5.1.9  鄰五氟苯甲基羥胺鹽酸鹽(C7H4NOF5·HCl,CAS號57981-02-9):純度≥98%。

 

5.1.10  無(wú)水硫酸鈉(Na2SO4,CAS號7757-82-6):分析純,用前在650°C灼燒4h,貯于干燥器中,冷卻后備用。

 

5.2標準品

 

20種醛酮類(lèi)標準物質(zhì):丙醛、2-異丁醛、3-甲基丁醛、2,3-丁二酮、己醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、苯乙醛、丁醛、戊醛、(E)-2-己烯醛、1-辛烯-3-酮、3-甲硫基丙醛、(E)-2-庚烯醛、辛醛、2-壬酮、(E,E)-2,4-庚二烯醛、(E)-2-辛烯醛、癸醛,純度≥95%,化學(xué)式、CAS號見(jiàn)附錄A。

 

 

 

5.3  溶液配制

 

5.3.1  飽和酒石酸氫鉀溶液(0.034mol/L):準確稱(chēng)取酒石酸氫鉀(5.1.6)640mg(精確至0.1mg),用高純水溶解并定容至100mL。

 

5.3.2  葡萄酒模擬溶液:取13mL乙醇(5.1.2)和87mL的飽和酒石酸氫鉀溶液(5.3.1)混合均勻,用酒石酸調節pH至3.3。

 

5.3.3  鄰五氟苯甲基羥胺衍生化試劑(20g/L):準確稱(chēng)取鄰五氟苯甲基羥胺(5.1.9)200mg(精確至0.1mg),用高純水溶解并定容至10mL。

 

5.3.4  硫酸溶液(0.05mol/L):取2.70mL硫酸(5.1.5),用高純水稀釋后定容至1L。

 

5.3.5  對氟苯甲醛溶液(15mg/L):準確稱(chēng)取對氟苯甲醛標準品(5.1.4)15mg(精確至0.1mg),用乙醇(5.1.2)溶解并定容至10mL,得到1500mg/L的對氟苯甲醛溶液,避光-20°C儲存,有效期6個(gè)月。取100μL1500mg/L的對氟苯甲醛溶液,用乙醇(5.1.2)定容至10mL,避光4°C儲存,有效期3個(gè)月。

 

5.3.6  標準儲備溶液:分別稱(chēng)取適量各種醛酮標準品,用乙醇(5.1.2)溶解并定容至10mL,避光-20°C儲存,有效期6個(gè)月。

 

5.3.7  標準工作溶液的母液配制:將20種醛酮化合物分成A、B兩組,A組包括:丙醛、2-異丁醛、3-甲基丁醛、2,3-丁二酮、己醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、苯乙醛。B組包括:丁醛、戊醛、(E)-2-己烯醛、1-辛烯-3-酮、3-甲硫基丙醛、(E)-2-庚烯醛、辛醛、2-壬酮、(E,E)-2,4-庚二烯醛、(E)-2-辛烯醛、癸醛。分別吸取適量A組9種醛酮化合物標準儲備液,用乙醇(5.1.2)配制為10mg/L的混合母液。分別吸取適量B組11種醛酮化合物標準儲備液,用乙醇(5.1.2)配制為1.0mg/L的混合母液,現用現配。

 

5.4  材料

 

5.4.1  固相萃取柱(官能化聚苯乙烯/二乙烯苯):12mL,1.0g或相當者。5.4.2離心管:50mL。

 

5.4.3  玻璃燒杯:200mL。

 

5.4.4  量筒:50mL。

 

5.4.5  刻度濃縮瓶:25mL。2SN/T5638—2023

 

 

6、儀器和設備

 

6.1  氣相色譜三重四級桿質(zhì)譜儀器:配有電子轟擊源(EI)。

 

6.2  分析天平:感量為0.0001g。

 

6.3  高速離心機:最大轉速≥10000r/min。

 

6.4  磁力攪拌器。

 

6.5  渦旋振蕩器。

 

6.6  移液器:0.5μL~10μL,20μL~200μL,100μL~1000μL。

 

6.7  氮氣吹干儀。

 

6.8  尼龍微孔濾膜:0.22μm。

 

 

7  試樣制備

 

    將酒樣搖勻后,倒取約50mL樣品于潔凈的玻璃燒杯中。

 

 

8、分析步驟

 

8.1  衍生化

 

    量取20mL樣品于離心管中,加入5μL15mg/L對氟苯甲醛溶液(5.3.5)作為內標,混勻后加入1mL20g/L鄰五氟苯甲基羥胺衍生化試劑(5.3.3),磁力攪拌15min,加入3g硫酸銨后充分搖勻。

 

8.2  凈化

 

8.2.1  將固相萃取柱放入固定架上,加樣前先用10mL二氯甲烷預洗柱,依次用10mL甲醇、10mL高純水活化萃取柱,待用。

 

8.2.2  將衍生液全部轉移至萃取柱上,用10mL葡萄酒模擬溶液(5.3.2)淋洗萃取柱,再用10mL硫酸溶液(5.3.4)洗滌萃取柱。用15mL二氯甲烷分三次洗脫萃取柱,并收集所有洗脫液至離心管中,加入1.5g無(wú)水硫酸鈉去除水分。轉移二氯甲烷層于刻度濃縮瓶中進(jìn)行氮吹,濃縮至1mL后過(guò)微孔濾膜,待測。

 

8.3  醛酮衍生物標準工作溶液的制備分別移取適量的A、B兩組母液(5.3.7)共同置于20mL容量瓶中,用葡萄酒模擬溶液(5.3.2)定容至刻度,得到標準工作溶液,分別配制得到A組濃度梯度為:2μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的混合標準溶液,對應的B組濃度梯度為:0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L。以下步驟按照按8.1和8.2與試樣同時(shí)處理。

 

8.4  空白試驗量取相同體積的水代替樣品,以下步驟按8.1和8.2與試樣同時(shí)處理。

 

8.5測定

 

8.5.1  儀器參考條件儀器參考條件如下:

 

    a)色譜柱:HP-5MSUI(30m×250μm×0.25μm)石英毛細管柱或相當者;

 

    b)色譜柱溫度程序:40°C保持1min;然后以8°C/min升溫至90°C,保持0.1min;再以4°C/min升至180°C,保持2min,再以30°C/min升至230°C,保持1min;

 

    c)載氣:氦氣,純度≥99.999%,流速:1.0mL/min;

 

    d)進(jìn)樣口溫度:250°C;

 

    e)進(jìn)樣量:1μL;

 

    f)進(jìn)樣方式:無(wú)分流進(jìn)樣,1.5min后打開(kāi)分流閥和隔墊吹掃閥;

 

    g)電子轟擊源:70eV;

 

    h)離子源溫度:230°C;

 

    i)接口溫度:250°C;

 

    j)每種化合物與鄰五氟苯甲基羥胺的衍生物的保留時(shí)間、定量離子對、定性離子對,見(jiàn)附錄A。

 

8.5.2  定性測定

 

    在相同實(shí)驗條件下進(jìn)行樣品測定時(shí),如果檢測的色譜峰的保留時(shí)間與標準樣品相一致,定性離子對的相對豐度(是用相對于最強離子豐度的強度百分比表示)與濃度相當的標準工作溶液的相對豐度一致,相對豐度允許偏差不超過(guò)表1規定的范圍,則可判斷樣品中存在對應的被測物。如果不能確證,應重新進(jìn)樣,以?huà)呙璺绞?有足夠靈敏度)或者采用增加其他確證離子的方式來(lái)確證。

 

表1定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

 

相對離子豐度/%	>50	>20~50	>10~20	≤10
允許的最大偏差/%	±20	±25	±30	±50

 

 

8.5.3  定量測量

 

    本方法采用內標法定量測定,內標物為對氟苯甲醛。選取與被測樣品響應值接近的標準溶液,醛酮類(lèi)物質(zhì)的鄰五氟苯甲基羥胺衍生物的多反應監測(MRM)

 

 

 

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